说明

应用

对于胰蛋白酶消化肽，胰蛋白酶：肽 使用约为 1：100 至 1:20 的比例。从培养表面除去粘附细胞是本产品的一个典型应用。 从其底物中去除细胞所需的胰蛋白酶浓度主要取决于细胞类型和培养物的年龄。 胰蛋白酶也被用于细胞培养期间细胞的再悬浮、蛋白质组学研究中的蛋白质消化和各种凝胶内消化。 其他应用包括：通过基于膜的技术评估结晶，用在确定动力学陷阱的存在会限制蛋白质的折叠速率和产量的一项研究中。

生化/生理作用

胰蛋白酶切割赖氨酸和精氨酸残基的 C 端肽。 如果酸性残基位于切割位点的任一侧，则该反应的水解速度减慢，并且如果脯氨酸残基位于切割位点的羧基侧，则停止水解。 胰蛋白酶活性的最适 pH 为 7-9。 胰蛋白酶还可以起到裂解氨基酸合成衍生物的酯和酰胺键的作用。 将 EDTA 作为螯合剂添加到胰蛋白酶溶液中，用于中和钙离子和镁离子，这些离子遮蔽胰蛋白酶作用的肽键。 去除这些离子会增加酶活性。

丝氨酸蛋白酶抑制剂，包括 DFP、TLCK、APMSF、AEBSEF 和抑肽酶等，将抑制胰蛋白酶。

组分

胰蛋白酶是由223个氨基酸残基的单链多肽所组成，通过从胰蛋白酶原在Lys - lle肽键处被切割去除N末端六肽而产生。 氨基酸的序列是由6个二硫桥所交联而成的。 这是胰蛋白酶、β-胰蛋白酶的天然形式。 β-胰蛋白酶可发生自溶，并在Lys - Ser残基处切割以产生α-胰蛋白酶。 胰蛋白酶是丝氨酸蛋白酶家族的一员。

注意

在1 mM HCl中的溶液经分装并储存在-20°C可稳定1年。Ca2+的存在将也会消除胰蛋白酶的自溶并维持其在溶液中的稳定性。 胰蛋白酶在2.0 M尿素、2.0 M盐酸胍或0.1% (w/v) SDS中可维持其绝大多数的活性。

单位定义

使用 BAEE 作为底物，一个 BAEE 单元，将在 pH 7.6，25℃ 下，每分钟产生 0.001 的 A253。

制备说明

可以1 mg/mL溶于1 mM HCl。

它还经TPCK处理并透析。 用L-1-甲苯磺酰胺-2-苯乙基氯甲基酮（TPCK）处理可降低通常存在于胰蛋白酶中的胰凝乳蛋白酶活性。